細胞名稱：人肝細胞HHL-5

產(chǎn)品規(guī)格：T25培養(yǎng)瓶x1；1.5ml凍存管x2

細胞數(shù)量：1x10^6；1x10^6

保存溫度：37℃；-198℃

運輸方式：常溫保溫運輸；干冰運輸

安全等級：1

用途限制：僅供科研3類

培養(yǎng)體系：DMEM高糖培養(yǎng)基+10%FBS+1%雙抗

培養(yǎng)溫度：37℃

二氧化碳濃度：5%

簡介：人肝細胞HHL-5取自男性正常肝組織.不規(guī)則形態(tài)，貼壁培養(yǎng)。

注釋：Transfected with:UniProtKB;P00552;Transposon Tn5 neo.

Transformant:NCBI_TaxID;333760;Human papillomavirus type 16(HPV16)[E6/E7(pLXSN)].

STR信息：/

參考文獻

PubMed=15780065;DOI=10.1111/j.1478-3231.2005.01017.x

Clayton R.F.,Rinaldi A.,Kandyba E.E.,Edward M.,Willberg C.,Klenerman P.,Patel A.H.

Liver cell lines for the study of hepatocyte functions and immunological response.

Liver Int.25:389-402(2005)

驗收細胞注意事項

1、收到人肝細胞HHL-5細胞，請查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快聯(lián)系。

2、收到人肝細胞HHL-5細胞，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題，細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時，請不要打開細胞培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時左右，讓細胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀察，此時多數(shù)細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理。

3、收到人肝細胞HHL-5細胞后，請鏡下觀察細胞，用恰當(dāng)方式處理細胞。若懸浮的細胞較多，請離心收集細胞，接種到一個新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進口胎牛血清。剛接到細胞，若細胞不多時血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細胞迏到80%左右，血清濃度還是在10％。

4、收到人肝細胞HHL-5細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出，留下5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。

5、將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里，存放于4℃冰箱，以備不時之需。

6、24小時后，細胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁，即可傳代。（貼壁細胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細胞生長面為準(zhǔn)）PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化，消化時間以具體細胞為準(zhǔn)，一般1-3分鐘，不超過5分鐘。可以放入37℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動瓶壁，見細胞脫落下來，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之完全脫落，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心，1000rpm/5min。棄上清，視細胞數(shù)量決定分瓶數(shù)，一般一傳二，如細胞量多可一傳三，有些細胞不易傳得過稀，有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶，以具體細胞和經(jīng)驗為準(zhǔn)。（懸浮細胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。

7、貼壁細胞，懸浮細胞。嚴(yán)格無菌操作。換液時，換新的細胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液，37℃，5%CO2培養(yǎng)。