細胞名稱：小鼠表皮細胞JB6Cl30-7b

產(chǎn)品規(guī)格：T25培養(yǎng)瓶x1；1.5ml凍存管x2

細胞數(shù)量：1x10^6；1x10^6

保存溫度：37℃；-198℃

運輸方式：常溫保溫運輸；干冰運輸

安全等級：1

用途限制：僅供科研2類

培養(yǎng)體系：DMEM高糖培養(yǎng)基（Hyclone）+10%胎牛血清（Gibco）+1%雙抗（Hyclone）

培養(yǎng)溫度：37℃

二氧化碳濃度：5%

簡介：小鼠表皮細胞JB6Cl30-7b細胞取自ICR小鼠，貼壁培養(yǎng)，不規(guī)則形態(tài)。

注釋：倍增時間46h。

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參考文獻

Frizzled4在小鼠毛囊周期中的表達

,PP.631-635

陳年,伍津津,邱偉明,唐輝,唐書謙

Keywords:Frizzled,毛囊,小鼠,Wnt,抗體

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Abstract:

目的探討Wnt蛋白的受體分子Frizzled4在小鼠毛囊周期中的表達、功能及其意義。方法利用實時定量PCR、RT-PCR、Westernblot和免疫熒光等技術(shù)分別檢測Frizzled4mRNA和蛋白在毛囊生長期（P1d、P3d、P8d）、退化期（P16d）和靜止期（P21d）中的表達。免疫熒光技術(shù)檢測Frizzled4在小鼠皮膚上皮細胞JB6cl30-7b中的定,位，MTT檢測用抗Frizzled4抗體處理JB6cl30-7b細胞后的增殖情況。結(jié)果在毛囊生長期早期，F(xiàn)rizzled4mRNA和蛋白在P1d的小鼠背部皮膚中表達明顯，膜表達于Bulge、毛囊外根鞘及毛球外側(cè)。在P3d，F(xiàn)rizzled4蛋白表達明顯上調(diào)，主要表達于Bulge、毛囊外根鞘、內(nèi)根鞘、precortex、部分毛球外側(cè)。在生長中期（P8d），F(xiàn)rizzled4蛋白的表達最強，集中在毛囊Bulge、外根鞘上段及內(nèi)根鞘。當(dāng)毛囊進入退化期（P16d），F(xiàn)rizzled4mRNA和蛋白的表達顯著降低（P<0.05），此時主要定,位于Bugle。而在靜止期，F(xiàn)rizzled4mRNA和蛋白表達最低（P<0.05），只有少量Frizzled4陽性細胞出現(xiàn)在毛囊Bulge。免疫熒光技術(shù)檢測Frizzled4蛋白同樣也在JB6cl30-7b細胞膜中表達。MTT結(jié)果顯示與對照組相比，10μg/mL的抗Frizzled4抗體處理JB6cl30-7b細胞后光密度值明顯降低（P<0.05），而20μg/mL的抗Frizzled4抗體處理后的光密度值降到最低（P<0.05）。結(jié)論Frizzled4在毛囊周期中的表達具有時空特異性。伴隨著毛囊的生長，F(xiàn)rizzled4的mRNA和蛋白水平都呈現(xiàn)高表達，隨著毛囊的退化而表達降低，直至靜止期維持低表達水平。拮抗Frizzled4蛋白的作用促使細胞增殖受到明顯抑制，提示Frizzled4的表達與毛囊細胞的增殖和分化相關(guān)。

驗收細胞注意事項

1、收到小鼠表皮細胞JB6Cl30-7b細胞，請查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快聯(lián)系。

2、收到小鼠表皮細胞JB6Cl30-7b細胞，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題，細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時，請不要打開細胞培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時左右，讓細胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀察，此時多數(shù)細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理。

3、收到小鼠表皮細胞JB6Cl30-7b細胞后，請鏡下觀察細胞，用恰當(dāng)方式處理細胞。若懸浮的細胞較多，請離心收集細胞，接種到一個新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進口胎牛血清。剛接到細胞，若細胞不多時血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細胞迏到80%左右，血清濃度還是在10％。

4、收到小鼠表皮細胞JB6Cl30-7b細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出，留下5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。

5、將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里，存放于4℃冰箱，以備不時之需。

6、24小時后，小鼠表皮細胞JB6Cl30-7b細胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁，即可傳代。（貼壁細胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細胞生長面為準(zhǔn)）PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml0.25%含EDTA的胰酶消化，消化時間以具體細胞為準(zhǔn)，一般1-3分鐘，不超過5分鐘?？梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動瓶壁，見細胞脫落下來，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之完全脫落，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心，1000rpm/5min。棄上清，視細胞數(shù)量決定分瓶數(shù)，一般一傳二，如細胞量多可一傳三，有些細胞不易傳得過稀，有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶，以具體細胞和經(jīng)驗為準(zhǔn)。（懸浮細胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。

7、貼壁細胞，懸浮細胞。嚴(yán)格無菌操作。換液時，換新的細胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

特別提醒：原瓶中培養(yǎng)基不宜繼續(xù)使用，請更換新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)。