Cyber Green 染料是一種綠色熒光核酸染料，可用于qPCR，解鏈曲線分析，嗜熱解旋酶依賴性擴(kuò)增（tHDA）的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，常規(guī)溶液DNA定量和各種凝膠電泳。 DNA結(jié)合的Cyber Green 染料的激發(fā)和發(fā)射光譜非常接近熒光素（FAM）或SYBR®Green，使染料與配備488 nm氬激光的儀器或任何波長(zhǎng)區(qū)域的可見光激發(fā)兼容。 Cyber Green 染料在熱和水解方面都非常穩(wěn)定，在日常處理過程中提供了便利。染料本身基本上是非熒光的，但在與dsDNA結(jié)合后變得高度熒光。熒光強(qiáng)度至少比化乙錠高一個(gè)數(shù)量級(jí)。此外，DNA / Cyber Green 復(fù)合物的熒光量子產(chǎn)率比DNA /乙錠的熒光量子產(chǎn)率高5倍以上。它可以在電泳（預(yù)染色）之前，以及在電泳（后染色）之后使用，并且通過毛細(xì)管電泳分離染色DNA。它也常用于分子生物學(xué)，不含酶（例如：Taq酶，逆轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)切核酸酶，T4連接酶）抑制，并且不干擾Southern blot(Southern印跡雜交)。

染料特點(diǎn)

高靈敏： 至少可檢出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍

信噪比高：樣品熒光信號(hào)強(qiáng)，背景信號(hào)低

操作簡(jiǎn)單：無須脫色或沖洗

適用范圍廣：可適用于多種電泳分析

使用方便：不影響其它修飾酶作用

經(jīng)濟(jì)：價(jià)格便宜

染色方案

我們發(fā)現(xiàn)通過后染色實(shí)現(xiàn)了大的靈敏度，這也消除了染料干擾DNA遷移的可能性。雖然預(yù)制方案更方便，但一些DNA樣本可能會(huì)出現(xiàn)遷移，強(qiáng)烈建議凝膠運(yùn)行時(shí)間不超過2小時(shí)。建議使用以下方案。 可能需要進(jìn)行一些比較以確定哪一個(gè)更符合您的需求。

1.后染色方案

1.1根據(jù)您的標(biāo)準(zhǔn)方案運(yùn)行凝膠。

1.2通過將10,000X儲(chǔ)備試劑稀釋到PH 7.5  -  8緩沖液中制備1X Cyber Green 工作溶液（例如，TAE，TBE或TE優(yōu)選pH8.0）。

注意：在水中制備的染色溶液不如在緩沖液中制備的染色溶液穩(wěn)定，必須在24小時(shí)內(nèi)使用，以確保大的染色靈敏度。另外，在pH低于約7.5或高于8.0的緩沖液中制備的染色溶液不太穩(wěn)定并且顯示出降低的染色效力。

1.3將凝膠放入合適的聚丙烯容器中。輕輕加入足量的1X染色溶液浸沒凝膠。

注意：不要使用玻璃容器，因?yàn)樗鼤?huì)吸附染色溶液中的大部分染料。

1.4在室溫下輕輕攪拌凝膠約30分鐘，避光。

注意：染色溶液可以在黑暗中儲(chǔ)存（冷藏）一周，最多重復(fù)使用2-3次。

1.5使用254 nm透射儀或使用長(zhǎng)路綠色濾光片（如SYBR®濾光片或GelStar®濾光片）的激光凝膠掃描儀對(duì)染色的凝膠成像。

2.預(yù)染色方案

2.1使用標(biāo)準(zhǔn)方案制備瓊脂糖凝膠溶液。

2.2在澆注凝膠前將10,000X Cyber Green?原液試劑以1：10,000稀釋到凝膠溶液中并充分混合。

2.3根據(jù)您的標(biāo)準(zhǔn)方案運(yùn)行凝膠。

2.4使用254 nm透射儀或使用長(zhǎng)路徑綠色濾光片（如SYBR®濾光片或GelStar®濾光片）的激光凝膠掃描儀對(duì)染色的凝膠成像。

3.電泳前的DNA染色

3.1在電泳前，用1：10,000稀釋的染料（TE，TBE或TAE）孵育DNA至少15分鐘。

3.2根據(jù)您的標(biāo)準(zhǔn)方案運(yùn)行凝膠。

3.3使用254 nm透射儀或使用長(zhǎng)路綠色濾光片（如SYBR®濾光片或GelStar®濾光片）的激光凝膠掃描儀對(duì)染色的凝膠成像。