花颖直播官方版_花颖直播平台官方app下载_花颖直播免费版app下载

返回主站|會員中心|保存桌面|手機瀏覽
普通會員

西安百螢生物科技有限公司

熒光探針,分子探針,核酸/蛋白質(zhì)標記、細胞檢測等技術和產(chǎn)品

新聞分類
  • 暫無分類

站內(nèi)搜索
 
友情鏈接
首頁 > 新聞中心 > 百螢 Annexin V,TRITC標記------研究細胞凋亡的工具
新聞中心
百螢 Annexin V,TRITC標記------研究細胞凋亡的工具
發(fā)布時間:2023-05-22        瀏覽次數(shù):3        返回列表

1. 百螢 Annexin V,TRITC標記參數(shù)

 

E x  (nm)    544

E m  (nm)    570

   ~36000

       Water

存儲條件    在零下15度以下保存,避光防潮

規(guī)        100次分析

有效成分    98%

       蛋白質(zhì)

 

2. 百螢 Annexin V,TRITC標記概述

Annexin V, TRITC標記是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的膜聯(lián)蛋白,膜聯(lián)蛋白是在鈣存在下與磷脂膜結合的蛋白質(zhì)家族。膜聯(lián)蛋白V是研究細胞凋亡的有價值的工具。它用作檢測在細胞表面表達磷脂酰絲氨酸的細胞的探針,這是細胞凋亡以及其他形式的細胞死亡中發(fā)現(xiàn)的特征。有多種參數(shù)可用于監(jiān)測細胞活力。Annexin V-dye共軛物被廣泛用于通過測量磷脂酰絲氨酸(PS)的轉運來監(jiān)測細胞凋亡。在細胞凋亡中,PS轉移到質(zhì)膜的外部小葉。磷脂酰絲氨酸在細胞表面的出現(xiàn)是細胞凋亡初始/中間階段的普遍指標,可以在觀察形態(tài)變化之前進行檢測。這種熒光TRITC-Annexin V偶聯(lián)物廣泛用于通過流式細胞儀或熒光顯微鏡監(jiān)測細胞凋亡。對于基于膜聯(lián)蛋白V的細胞凋亡檢測的微孔板檢測,我們建議您使用Cell Meter?試劑盒。百螢生物是AAT Bioquest 的中國代理商,為您提供優(yōu)質(zhì)的Annexin V, TRITC標記探針。


3. 實驗操作步驟

(1)用膜聯(lián)蛋白V綴合物制備和孵育細胞:

(1.1)制備膜聯(lián)蛋白V綴合測定緩沖液:10mM HEPES,140mM NaCl和2.5mM CaCl 2,pH 7.4。

(1.2)用測試化合物處理細胞一段所需的時間(用星形孢菌素處理的Jurkat細胞4-6小時)以誘導細胞凋亡。

(1.3)離心細胞,得到1-5×10 5個細胞/管。

(1.4)將細胞重懸于200μLAnnexin V結合測定緩沖液中(來自步驟1.1)。

(1.5)在細胞中加入2μL膜聯(lián)蛋白V結合物。

可選:在細胞內(nèi)加入死細胞染色劑如碘化丙錠,用于壞死細胞。

(1.6)ncubate在室溫下進行30至60分鐘,避光。

(1.7)在用流式細胞儀或熒光顯微鏡分析細胞之前,加入300μLAnnexin V結合測定緩沖液(來自步驟1.1)以增加體積(參見下面的步驟1.8)。

(1.8)使用流式細胞儀或熒光顯微鏡監(jiān)測熒光強度(參見下面的步驟2或3)。

 (2)使用流式細胞儀分析:

通過使用具有適當過濾器的流式細胞儀來量化膜聯(lián)蛋白V綴合物。

注意:粘附細胞上的膜聯(lián)蛋白V 結合流式細胞術分析未經(jīng)常檢測,因為在細胞分離或收獲期間可能發(fā)生特定的膜損傷。然而,Casiola-Rosen等人先前報道了利用膜聯(lián)蛋白V對貼壁細胞類型進行流式細胞術的方法。和van Engelend等人(見參考文獻1和2)。

 (3)使用熒光顯微鏡分析:

(3.1)移液器從步驟(1.6),將細胞懸浮液沖洗1-2次用甲nnexin V-結合測定緩沖液(來自步驟1.1) ,然后與A重懸細胞 nnexin V-結合測定緩沖液(來自步驟1.1) 。將細胞添加到蓋有玻璃蓋玻片的載玻片上。

注意:對于粘附細胞,建議直接在蓋玻片上生長細胞。與膜聯(lián)蛋白V綴合物(步驟1.6)孵育后,用Nnexin V結合測定緩沖液(來自步驟1.1)沖洗1-2次,并將A nnexin V結合測定緩沖液(來自步驟1.1)加回到蓋玻片中。在玻璃載玻片上翻轉蓋玻片并觀察細胞。在與膜聯(lián)蛋白V綴合物孵育后,細胞也可以在2%甲醛中固定,并在顯微鏡下觀察。

(3.2)在熒光顯微鏡下用適當?shù)臑V光片分析膜聯(lián)蛋白V綴合物的凋亡細胞。

4.參考文獻

 

Response of Mammalian cells to non-thermal intense narrowband pulsed electric fields
Authors: Sunao Katsuki, Yulan Li, Daiki Miyakawa, Ryo Yamada, Nobuaki Onishi, Soowon Lim
Journal: (2017): 1358--1361

管理入口| 返回頂部 ©2024 西安百螢生物科技有限公司 版權所有   技術支持:商易網(wǎng)   訪問量:1169